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Citrus exocortis viroid and Hop Stunt viroid Doubly infecting grapevines in Brazil Videiras duplamente infectadas pelo Citrus exocortis viroid e Hop stunt viroid no Brasil

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Author(s): Marcelo Eiras | Maria Luisa P.N. Targon | Thor V.M. Fajardo | Ricardo Flores | Elliot W. Kitajima

Journal: Fitopatologia Brasileira
ISSN 0100-4158

Volume: 31;
Issue: 5;
Start page: 440;
Date: 2006;
Original page

Keywords: CEVd | HSVd | Pospiviroid | Hostuviroid | Pospiviroidae | CEVd | HSVd | Pospiviroid | Hostuviroid | Pospiviroidae

ABSTRACT
Viroids, non-protein-coding small (246-401 nt) circular single-stranded RNAs with autonomous replication, are currently classified into two families. Within the family Pospiviroidae, Citrus exocortis viroid (CEVd) belongs to the genus Pospiviroid while Hop stunt viroid (HSVd) is the single member of the genus Hostuviroid. These pathogens are distributed worldwide and infect a large number of hosts. In Brazil, isolates of CEVd and HSVd have been detected in both citrus and grapevine. To characterize and study the genetic variability of these viroids, total RNA from leaves of grapevine Vitis vinifera 'Cabernet Sauvignon' and V. labrusca 'Niagara Rosada' from Bento Gonçalves, RS, was used as a template for RT-PCR amplification with specific primers for the five viroids described infecting grapevines [HSVd, CEVd, Grapevine yellow speckle viroid 1 (GYSVd-1), Grapevine yellow speckle viroid 2 (GYSVd-2) and Australian grapevine viroid (AGVd)]. Leaf samples of Citrus medica infected with CEVd from São Paulo were also analyzed. The resulting products were separated by agarose gel electrophoresis and DNA fragments of the expected size were eluted, cloned and sequenced. The grapevine samples analyzed were doubly infected by CEVd and HSVd. A phylogenetic analysis showed that the Brazilian grapevine HSVd variants clustered with other grapevine HSVd variants, forming a specific group separated from citrus variants, whereas the Brazilian CEVd variants clustered with other citrus and grapevine variants.Os viróides são os menores fitopatógenos conhecidos, sendo constituídos de uma molécula de RNA fita simples, circular, com forte estrutura secundária. Possuem genomas que variam entre 246 e 401 nucleotídeos e, por não traduzirem proteínas próprias, são totalmente dependentes da célula hospedeira para sua replicação. São classificados em duas famílias e sete gêneros. O Citrus exocortis viroid (CEVd) pertence ao gênero Pospiviroid, enquanto o Hop stunt viroid (HSVd) é o único membro do gênero Hostuviroid, ambos pertencentes à família Pospiviroidae. Estes patógenos apresentam ampla distribuição mundial e infectam um grande número de hospedeiras. No Brasil, isolados do CEVd e do HSVd foram detectados em citros e videiras. Com o objetivo de caracterizar e estudar a variabilidade genética destes viróides, promoveu-se extração de RNA total de folhas de videira Vitis vinifera 'Cabernet Sauvignon' e V. labrusca 'Niagara Rosada' provenientes de Bento Gonçalves, RS, e RT-PCR com oligonucleotídeos específicos para os cinco viróides já descritos em videira [HSVd, CEVd, Grapevine yellow speckle viroid 1 (GYSVd-1), Grapevine yellow speckle viroid 2 (GYSVd-2) e Australian grapevine viroid (AGVd)]. Amostras de folhas de Citrus medica infectadas pelo CEVd provenientes de São Paulo também foram analisadas. Os fragmentos de DNA amplificados foram eluídos, clonados e seqüenciados. As análises das seqüências revelaram que as amostras de videira estavam duplamente infectadas com o CEVd e HSVd. As análises filogenéticas mostraram que os clones de HSVd de videira aqui caracterizados agruparam-se com outros variantes de videira, formando um grupo separado de um segundo formado por variantes de citros. Já os clones de CEVd de videira agruparam-se com isolados de citros e videira.
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