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Cuantificación, aislamiento e identificaciónde comunidades anaerobias amilolíticas de un manantial termomineral de Paipa, Boyacá

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Author(s): Posada Yully | Agudelo Alejandra | Álvarez Elsa | Díaz Carolina | Joulian Catherine | Ollivier Bernard | Baena Sandra | Liliana Pachón | Marie-Laure Fardeau

Journal: Revista Colombiana de Biotecnología
ISSN 0123-3475

Volume: VI;
Issue: 2;
Start page: 90;
Date: 2004;
Original page

Keywords: thermophile | hot springs | anaerobiosis | Thermoanaerobacter | DGGE | termofilia | manantiales termominerales | anaerobiosis | Thermoanaerobacter | DGGE

ABSTRACT
Se cuantif icaron microorganismos anaerobios termofílicos amilolíticos de un manantial termomineral en la región andina (5° 45' 69’’ N, 73° 6' 61’’ W, 2500 msnm) a través del Número Más Probable (NMP). Los recuentos microbianos de las poblaciones presentaron valores entre 1,9*102 células/100 mL y 5.8*102 células/100 mL en presencia de almidón y tiosulfato como aceptor de electrones y 1,4*102células/100 mL y 3,4*102 células/100 mL en presencia solamente de almidón. Se realizaron aislamientos microbianos a partir de las últimas diluciones positivas del NMP y se aislaron 8 cepas bacterianas denominadas P4-6, P4-7, P4-8, P4-9, P4-10, P4-11, P4-12 y P4-13. Estas cepas crecieron a temperaturas óptimas entre 60 y 65 °C, y exhibieron un metabolismo fermentativo. El principal producto de fermentación fue etanol seguido de acetato, CO2 e hidrógeno. El tiosulfato fue utilizado como aceptor externo de electrones, pero el sulfato o el hierro férrico no fue reducido. La diversidad filogenética de estas 8 cepas fue evaluada por medio de geles de electroforesis de gradiente denaturalizante (DGGE). Se analizó la secuencia del gen 16S rRNA de dos de las cepas aisladas (P4-6 y P4-9) y el análisis indicó que éstas pertenecen a la familia Thermoanaerobiaceae del dominio Bacteria. Del análisis fenotípico y genotípico se deduce que estos organismos pertenecen al género Thermoanaerobacter, y con base en el análisis de las secuencias del 16S rDNA se observa una similitud del 98% con Thermoanaerobacter italicus y Thermoanaerobacter mathranii.Palabras clave: termofilia, manantiales termominerales, anaerobiosis, Thermoanaerobacter, DGGEABSTRACTThe amilolytic thermophilic anaerobic microorganisms of a mineral hot spring in the Andean region (5° 45’69’’ N, 73° 6’61’’W, 2500 m) were quantified through the Most Probable Number (MPN) technique. Themicrobial recounts of the populations presented values between 1.4*102 cell/100 mL and 5.8*102 cell/100 mL inthe presence of starch and thiosulphate as electron acceptors and 3.4*102 cel/100 mL in the presence of starchalone. Microbial isolations were conducted starting with the last positive dilutions of theMPNand 8 bacterialstrains were isolated and denominated P4-6, P4-7, P4-8, P4-9, P4-10, P4-11, P4-12, and P4-13. These strainsgrew at optimum temperatures between 60 and 65 °C and exhibited fermentative metabolism. The mainproduct of fermentation was ethanol followed by acetate together with hydrogen andCO2. Thiosulphate wasused as external acceptor of electrons by all the isolated strains, but not sulphate or ferric iron. Thephylogenetic diversity of these 8 strains was evaluated through denaturing gel gradient electrophoresis(DGGE) analysis. The sequence of the gene encoding for the 16S rRNA of two of the isolated strains (P4-6 andP4-9) was analyzed. These analyses showed that they belong to the family Thermoanaerobiaceae, domainBacteria. From their phenotypical and genotypical characteristics, it is inferred that these organisms belong tothe genus Thermoanaerobacter with similarity of 98% of the 16S rDNA with Thermoanaerobic italicus andThermoanaerobacter mathranii.Key words: thermophile, hot springs, anaerobiosis, Thermoanaerobacter, DGGE
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