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Detección de proteínas de adhesión a fibronectina y colágeno presentes en Leptospira interrogans serovar Canicola

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Author(s): Gisele Reyes | Reinier Borrero | Aniel Moya | María de los Angeles Padrón | Michel Acosta | Rubén Cabrera, | Luis García

Journal: VacciMonitor
ISSN 1025-028X

Volume: 16;
Issue: 3;
Start page: 1;
Date: 2007;
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Keywords: Leptospira | colágeno | fibronectina | cromatografía de afinidad.

ABSTRACT
Como parte de los estudios encaminados a la obtención de una formulación vacunal por subunidades contra laleptospirosis humana, se describe la purificación y caracterización de las proteínas de unión a fibronectina y a colágenoen Leptospira interrogans. Las proteínas de la membrana externa fueron extraídas mediante la solubilización conTritón X-114 y se aplicaron en una columna de afinidad de IgG AntiBSA-Sepharose 2B CL, para eliminar la BSA,contaminante principal del medio de cultivo en que crece el microorganismo. La muestra libre de BSA (no fijado) seaplicó a una columna de afinidad de fibronectina Sepharose 4B-CNBr, que permitió la separación y detección de unafracción que contenía una proteína de unión a fibronectina presente en la cepa 87 de Leptospira interrogans serovarCanicola, cuyo peso molecular fue estimado en 40 kDa. La proteína aislada demostró ser antigénica y conservada enlos serovares Canicola, Copenhageni y Mozdok, en el ensayo de inmunodetección utilizado en este estudio (Dot blot).Para ello se utilizaron sueros específicos obtenidos en ratas infectadas experimentalmente con cada serovar y unamezcla de sueros de humanos convalecientes de leptospirosis. Las proteínas de membrana externa solubilizadas con Tritón X-114, libres de BSA, fueron aplicadas también a una columna de afinidad colágeno-Sepharosa 4B-CNBr, que permitió la purificación de una proteína de unión a colágeno con un peso molecular de aproximadamente 25 kDa, la cual resultó ser antigénica frente a sueros de humanos convalecientes de la enfermedad. Ambas proteínas seleccionadas (40 kD y 25 kD) podrían ser evaluadas como posibles inmunógenos en futuros estudios encaminados a la obtención de nuevos antígenos vacunales.
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