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Evaluación de las pruebas de PCR TcH2AF-R y S35-S36 para la detección de Trypanosoma cruzi en tejido cardiaco de ratón Evaluation of TcH2AF-R and S35-S36 primers in PCR tests for the detection of Trypanosoma cruzi in mouse cardiac tissue

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Author(s): Concepción Judith Puerta | Johana María Guevara | Paula Ximena Pavía | Marleny Montilla | Rubén Santiago Nicholls | Edgar Parra | Yuli Katherine Barrera

Journal: Biomédica
ISSN 0120-4157

Volume: 28;
Issue: 4;
Start page: 616;
Date: 2008;
Original page

Keywords: Trypanosoma cruzi | enfermedad de Chagas | cardiomiopatía chagásica | reacción en cadena de la polimerasa

ABSTRACT
Introducción. El trasplante es una opción terapéutica en la cardiomiopatía chagásica. Para la detección temprana de una posible reactivación de la infección, se propone el uso de pruebas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a partir de biopsias endomiocárdicas; el modelo de ratón es una aproximación preliminar para evaluar la aplicación de éstas. Objetivo. Evaluar la aplicación de las pruebas de PCR basadas en los iniciadores TcH2AF-R y S35-S36 para la detección de T. cruzi en tejido cardiaco de ratones infectados con el parásito. Materiales y métodos. Se infectaron por vía intraperitoneal dos grupos de ratones ICR de 15 y 10 individuos con 0,3 ml de PBS que contenían 1x106 tripomastigotes de la cepa MHOM/CO/ 2001/D.A. (T. cruzi I) o 1x104 tripomastigotes de la cepa MHOM/BR/00/Y (T. cruzi II), respectivamente. El seguimiento de la parasitemia se realizó mediante microhematocrito y presencia de parásitos en el corazón a los 30, 60 (modelo agudo), 100 y 150 (modelo crónico) días por medio de histopatología y de las PCR TcH2AF-R y S35-S36. Resultados. La histopatología mostró alteraciones en el miocardio y presencia de amastigotes en los modelos agudo y crónico. En contraste al microhematocrito y al análisis histopatológico, la PCR S35-S36 permitió la detección de ambas cepas del parásito. La PCR TcH2AF-R detectó la cepa T. cruzi I con un desempeño superior al microhematocrito y al análisis histopatológico. Conclusiones. El uso de ambas pruebas de PCR puede ser útil en la confirmación de la reactivación de la infección postrasplante.Introduction. Heart transplant is a therapeutic option in the treatment of chagasic cardiomyopathy. For early detection of Chagas reactivation cases, the use of PCR tests using endomyocardial biopsies has been proposed. Development of an animal model will be the first step in evaluating the applicability of this approach. Objective. PCR tests based on the TcH2AF-R and S35-S36 primers were evaluated for the detection of T. cruzi in heart tissue of mice experimentally infected with the parasite. Materials and methods. Two groups of ICR mice of 15 and 10 individuals were infected by intraperitoneal injection with 0.3 ml of PBS containing 1x106 trypomastigotes of the MHOM/CO/ 2001/D.A. (T. cruzi I) strain or 1x104 trypomastigotes of MHOM/BR/00/Y (T. cruzi II) strain. Parasitemia and cardiac parasitic infection were determined at 30, 60 (acute model), 100 and 150 (chronic model) days by means of histopathological examination and by PCR, using the TcH2AF-R and S35-S36 primers. Results. The histopathological findings revealed alterations in the heart and the presence of intracellular amastigotes in acute and chronic models. In contrast to parasitemia levels and histopathological analyses, S35-S36 PCR detected infections in mice that were infected with either parasite strain. TcH2AF-R PCR detected T. cruzi I-infected mice earlier and more frequently than inspection for parasitemia or histopathological examination. Conclusions. Applying PCR tests with both primers proved superior for Chagas disease confirmation over currently standard detection methods.
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