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Identificación y tipificación de Haemophilus influenzae mediante PCR múltiple

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Author(s): CLAUDIA MARu00CDA GARCu00CDA | PATRICIA LOZANO | JOSu00C9 ANTONIO RIVERA | SILVIA GIONO | YGNACIO MARTu00CDNEZ | ROSA DEL CARMEN ROCHA-GRACIA

Journal: Universitas Médica
ISSN 0041-9095

Volume: 49;
Issue: 4;
Start page: 436;
Date: 2008;
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ABSTRACT
Se diseñó una estrategia metodológica para la detección simultánea entre Haemophilus influenzae serotipo b (Hib) y no tipificable (HiNT), así como para discriminar entre H. influenzae, Moraxella catarrhalis y Streptococcus pneumoniae. El estudio se realizó en una recolección de 64 cepas, las cuales se sometieron a amplificación por PCR utilizando ADN genómico o directamente el cultivo bacteriano como plantilla. La PCR se realizó en dos fases: 1) PCR triple para discriminar entre H. influenzae y M. catarrhalis empleando oligonucleótidos específicos para los genes del ARNr 16S y de la neumolisina (Ply) para identificar S. pneumoniae; 2) PCR doble para la identificación simultánea de Hib y HiNT, utilizando oligonucleótidos específicos de los genes cap y hmw. Se logró la amplificación del gen ARNr 16S en las 64 cepas de H. influenzae, sin obtenerse amplificación en las cepas control. La secuencia Bex A se amplificó en 29 de 32 cepas de Hib, y la secuencia HMWA se amplificó en 29 de 30 cepas de HiNT. La amplificación con los oligonucleótidos específicos para M. catarrhalis y S. pneumoniae no mostró productos con ninguna cepa de H. influenzae. Estos resultados permiten proponer la aplicación de esta herramienta metodológica para discriminar entre M. catarrhalis y S. pneumoniae, e identificar H. influenzae directamente a partir de muestras clínicas.
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